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大量DNA產(chǎn)物純化試劑盒說明書
更新時(shí)間:2015-05-20 點(diǎn)擊量:1189

  

                               大量DNA產(chǎn)物純化試劑盒說明書

 

MaxiDNA Purification Kit

 大量DNA產(chǎn)物純化試劑盒

 

   目錄號:  YJ0517

   保   存:  室溫

 

 

   組分說明

 

                                         Cat.No.                  YJ0517

                                         KitSize                     50

                                        BufferPB                   60ml

                                        BufferPS                   15ml

                               BufferPW(concentrate)                10ml

                                        BufferEB                   10ml

                                     SpinColumnDL                   50

                                CollectionTube(2ml)                 50

  產(chǎn)品簡介

 

      本試劑盒采用新型硅基質(zhì)膜技術(shù),通過快速簡單的結(jié)合-洗滌-洗脫步驟即可從大量的 PCR 產(chǎn)物或酶反   應(yīng)液(酶切,連接,探針標(biāo)記等)中純化 50 bp-50 kb 的 DNA 片段,純化過程中可有效去除引物、寡核苷酸、酶等雜質(zhì),從而獲得高純度,高濃度,完整性好的 DNA 片段,回收率高達(dá) 90%。本試劑盒回收純化的 DNA 可 直接用于測序、連接和轉(zhuǎn)化、標(biāo)記、體外轉(zhuǎn)錄等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

 

注意事項(xiàng)

 

1.  本試劑盒可無選擇性的回收溶液中所有 DNA 片段,如需選擇性回收特定片段,同時(shí)去除其他不同大小片段,請選擇我公司的膠回收試劑盒(YJ0524, 加 YJ2302,YJ0518 或 YJ0526)。

 

2.  *次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在BufferPW中加入無水乙醇。

 

3.  使用前請檢查BufferPB是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀,如有結(jié)晶或者沉淀現(xiàn)象,可在37℃水浴幾分鐘,即可恢復(fù)澄清。

 

4. 回收率與初始DNA量和洗脫體積有關(guān)。

 

5. 所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心。

 

自備:無水乙醇,離心管

 

 

               操作步驟

 

    1.   估計(jì)DNA反應(yīng)液的體積,加入5倍體積的Buffer PB,充分混勻(如DNA反應(yīng)體系為100μl,則加 入500μlBufferPB,無需去除石蠟油或礦物油)。

 

      注意:在加入BufferPB后檢測溶液的pH值,若pH值大于7.5,可向其中加入10-30μl 的3M醋酸鈉(pH5.0),從而將pH值調(diào)到5-7。

 

    2.    柱平衡:向已裝入收集管(CollectionTube)中的吸附柱(SpinColumnDL)中加入200μl Buffer PS,     12,000rpm(~13,400×g)離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

 

    3.   將步驟1中所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中,室溫放置2分鐘,12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。

 

注意:吸附柱容積為700μl,若樣品體積大于700μl可分批加入 。

 

    4.   向吸附柱中加入650 μl Buffer PW(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。

 

 注意:如果純化的DNA用于鹽敏感實(shí)驗(yàn)(例如平末端連接實(shí)驗(yàn)或直接測序),建議加入BufferPW后靜置2-5分鐘再離心。

   5.  12,000rpm離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘,以*晾干。

 

   注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。為確保下游實(shí)驗(yàn)不受殘留乙醇的影響,建議將吸附柱開蓋,置于室溫放置數(shù)分鐘,以*晾干吸附材料中殘余的乙醇。

  6.   將吸附柱放到一個(gè)新離心管(自備)中,向吸附膜中間位置懸空滴加100 μl Buffer EB(pH 8.5),室溫放置2分鐘。12,000rpm離心1分鐘,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

 

      注意:1)洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液,應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5之間(可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍)。

 

   2)為了提高DNA的回收量,可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中,重復(fù)步驟6。

 

   3)洗脫體積不應(yīng)小于50μl,體積過少會影響回收效率。

 

    4)如果使用TE洗脫,需要考慮其中含有的EDTA是否會影響后續(xù)的酶促反應(yīng)。

 

    5)回收大于10kb的DNA片段時(shí),BufferEB應(yīng)在50℃水浴中預(yù)熱,適當(dāng)延長吸附和洗脫時(shí)間,可增加回收效率。

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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