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O型口蹄疫抗體檢測試劑盒使用說明書
更新時(shí)間:2020-01-10 點(diǎn)擊量:3554

O型口蹄疫抗體檢測試劑盒

使用說明書

 

【產(chǎn)品簡介】

口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)抗體檢測試劑盒用于檢測豬、牛、羊血清中的O型口蹄疫病毒抗體,用于評估口蹄疫苗免疫狀況。

本試劑盒采用阻斷ELISA法,在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被口蹄疫病毒抗原。在試驗(yàn)中,加入稀釋后的待檢血清,經(jīng)過溫育后,若樣品中含有口蹄疫病毒抗原特異性抗體,則與包被板上的抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶標(biāo)的抗VP1單抗,樣本中的抗體阻斷了單抗與包被板上抗原的結(jié)合;經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物;在微孔中加入TMB底物液,經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍(lán)色信號與樣本中的抗體含量成反比,加入終止液終止反應(yīng)后,用酶標(biāo)儀450nm波長測定反應(yīng)孔中的吸光度OD值。

【組份】

1

抗原預(yù)包被板條

1/2塊

6

終止液

6/11ml

2

酶結(jié)合物

7/14ml

7

陰性對照

0.25/0.5ml

3

10倍濃縮洗滌液

50/100ml

8

陽性對照

0.15/0.3ml

4

顯色液

11/22ml

9

封板膜

2/4張

5

說明書

1份

10

樣本稀釋液液

8ml

 

【需自備的設(shè)備及試劑】

1. 微量移液器:10µl-100µl、100µl-1000µl。

2. 一次性移液器吸頭。

3. 量筒:500ml。

4. 96孔板酶標(biāo)儀。

5. 蒸餾水或去離子水。

6. 洗瓶或洗板機(jī)。

【樣品制備】

取動物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血。

【洗滌液的準(zhǔn)備】

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫,如有鹽結(jié)晶,搖動使結(jié)晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

【注意事項(xiàng)】

1. 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,使用前應(yīng)搖勻,使用后放回2-8℃。

2. 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。

3. 底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。

4. TMB(顯色液)不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。

5. 檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2-8℃)。

6. 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。

7. 嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得zui好的結(jié)果。操作過程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須精確。

8. 抗原包被板為一次性用品,不得重復(fù)使用。

【操作步驟】

1. 每次試驗(yàn)均設(shè)置陽性對照1孔、陰性對照2孔;

2. 將待檢板條按20ul/孔加入樣本稀釋液;

3. 將樣品和陰陽性對照品按20ul/孔加入孔內(nèi)(移液器槍頭請勿混用);

4. 每孔加酶結(jié)合物60μl,輕微振蕩混勻,蓋上封板膜,置37℃溫育45分鐘。

5. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內(nèi)液體,以上步驟重復(fù)4-6次,zui后在干凈吸水紙上拍干。

6. 每孔加顯色液100µl,混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。

7. 每孔加終止液50μl,使反應(yīng)終止,10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。

【結(jié)果判定】

    用酶標(biāo)儀于450nm630nm作參比波長)讀取吸光度OD值。

試驗(yàn)成立的條件是

陰性對照(NOD值>0.5、同時(shí)陽性對照(P)阻斷率>45%;

計(jì)算方法:

PI (阻斷率)=  1 —(樣品OD值 ÷ 陰性O(shè)D均值)x100%

陰陽性判斷:

牛、羊樣本

PI(阻斷率)>45%則判斷為陽性;

PI45%則判斷為陰性。

【有效期】

貯存方法: 2 - 8ºC下貯存。

有效期: 12個(gè)月。

細(xì)胞培養(yǎng)及相關(guān)

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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